工程菌的构建及融合蛋白的生物学活性分析

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

何亚南 孙钰椋 任雅坤 梁盛英 杨芬 刘彦礼 林俊堂

摘要： 目的：构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K（Staphylococcal Enterotoxin-like K, SElK）和绿色荧光蛋白（GFP）融合基因的工程菌，并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法：利用PCR和Overlap PCR克隆获得SElK-GFP融合基因，并插入pET28a表达载体中，通过菌落PCR，质粒双酶切及测序验证后，将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到E.coli BL21菌株中进行诱导表达，通过 Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白；并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖；ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果：成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌，纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光，融合蛋白生物学活性分析表明，SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖；同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论：本研究成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白，其不仅保留了SElK的超抗原活性，同时兼具GFP绿色荧光的可视性，为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。

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