分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建适用于干细胞专利价值评估的指标模型，并对现实场景中除指标内容外影响干细胞专利转移转化的因素进行分析。方法：基于中国技术交易所《专利价值分析指标体系》构建适用于干细胞的专利价值评估体系，采用层次分析法确定权重，通过案例分析验证指标模型的可操作性。结果：基于干细胞的技术特点与指标可操作性构建了适用于干细胞专利价值评估的指标体系，包括技术价值度、市场价值度和法律价值度3个一级指标，技术先进性、技术成熟度、技术成本等9个二级指标，其中，技术先进性、技术成熟度、政策适应性以及市场需求是对干细胞专利价值评估影响力最大的指标。其他因素的分析中，技术核心优势是影响干细胞专利转移转化的关键，此外，技术可行性、质量控制与远期收益均对干细胞技术的成功转移转化有着重要的影响。结论：本文建立的专利价值评估模型与因素分析可用于干细胞领域的专利价值评估，有助于推动专利技术的有效开发和产业化。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR-associated)系统是近年来发展起来的新型的基因编辑技术，在生物医学领域得到广泛应用。CRISPR/Cas9系统需要在gRNA存在的条件下通过Cas9蛋白实现对基因组的定点编辑，通常情况下以慢病毒感染或质粒转染等方式提供Cas9和gRNA。但是，这些方式容易引起免疫反应及基因片段不可控插入，存在一定的风险，限制了CRISPR/Cas9技术在机体的应用。近年来发展起来的基于体外组装的核糖核蛋白（Ribonucleoprotein, RNP）转导入胞的策略由于快捷安全、编辑的脱靶率低等优势引起广泛关注。本文对Cas9 RNP的转导方式及其应用进行了总结，并就其目前存在的问题进行探讨,以期为CRISPR/Cas9技术的进一步发展提供依据，为拓展其应用奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是引起病毒性乙型肝炎的主要病原体，依然是影响人类健康的全球性问题。干扰素和核苷（酸）类似物是国内外获批上市的主要抗乙肝病毒药物。替诺福韦和恩替卡韦在国外抗乙肝病毒药物市场上占据巨大的份额，而早期推出的拉米夫定和阿德福韦酯因其耐受性和安全性等原因所占市场份额逐年减少。国外有39种抗乙肝病毒新药正处于临床阶段。国内临床上使用更多的是口服核苷(酸)类似药物，尤其是恩替卡韦近年来占近一半抗乙肝药物市场。抗乙肝病毒药物城市零售前10的企业市场份额占整个零售的91.8%，市场集中度较高。虽然国内乙肝新药研发水平与欧美还存在较大差距，但是在国内创新政策推动下，出现了东阳光、正大天晴等20余家从事研发企业，并取得一定的成效。基于我国抗乙肝病毒药物发展困境，提出了继续完善抗乙肝病毒药物医保政策、部署和实施乙型肝炎重大专项等研发项目、推进产学研用深度融合等对策建议。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 重组蛋白/多肽类药物在人体血清内半衰期较短, 很大程度上限制了其临床应用。人血清白蛋白（HSA）具有半衰期长、生物相容性好、低免疫原性等优点，是理想的药物载体。各种基于HSA的蛋白药物长效化技术得到了广泛的应用和发展，目前主要包括构建HSA融合蛋白，通过共价化学键与HSA偶联，通过非共价键与HSA可逆性结合。本文总结了近年来基于白蛋白药物长效化技术的发展，各项技术的优缺点及药物开发现状。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 细胞获取和培养的过程是组织工程构建的重要环节；3D生物打印技术可以支撑组织工程的发展。通过“声波”使微量流体在惯性力和流体粘性力相互作用下实现脉冲流动的压电式微喷技术应用于细胞打印领域属于新兴工艺，具有精度高、效率高、成本低等特征。在介绍压电式微喷技术系统和原理基础上，分析了压电驱动方式、压电参数、脉冲驱动电压波形、生物细胞油墨对细胞打印的影响；给出了压电式微喷技术在高存活率细胞获取、高效率构建细胞三维组织方面的应用研究案例；总结了其在细胞打印领域的应用现状，并指出研究方向及意义。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建噬菌体天然纳米抗体展示库，以期用于筛选不同抗原分子的纳米抗体筛选平台，并用艰难梭菌谷氨酸脱氢酶（GDH）抗原筛选靶向GDH的纳米抗体，对所构建的噬菌体天然纳米抗体展示库进行验证。 方法：采用Oligo DT提取双峰骆驼脾脏总RNA进行反转录，通过巢氏PCR获取全套重链可变区基因，将其构建到噬菌粒pCANTAB5E载体，经多次电转化至E.coil TG1 构建初级噬菌体抗体库，经辅助噬菌体拯救后构成噬菌体展示库，并对噬菌体展示库的库容及多样性进行分析和鉴定。同时以GDH为靶向抗原对文库进行淘筛，计算淘筛回收率，并对第三轮淘筛后平板的单克隆进行ELISA鉴定。 结果：构建的天然噬菌体纳米抗体库的插入率为95%左右，随机挑取的9个克隆氨基酸同源性为66.17%，经MEGA分析后具有较好的多样性，同时经辅助噬菌体拯救后，得到的噬菌体展示库滴度为4×1012 CFU/ml。在三轮淘筛过程中，回收率逐步升高，噬菌体得到了有效的富集，同时对阳性克隆进行测序及分析，最终得到2条抗GDH纳米抗体序列。结论：成功构建了双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示文库且多样性良好，为后续筛选其他的靶向抗原奠定了基础，同时筛选获得两条抗GDH纳米抗体序列，为制备艰难梭菌谷氨酸脱氢酶诊断抗体提供技术支撑。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 基因编辑技术掀起了全球研发热潮，尤其是CRISPR技术成为最有发展前景的基因组编辑技术，迅速实现了在畜禽育种、生物医药研发等领域的应用，相关临床试验已经开展，其发展带动了生物产业发展的新方向，孕育了巨大的社会经济价值，目前产业格局已初步形成。我国对基因编辑一直高度重视，在科研上也紧跟国际发展步伐，取得了一系列突破性成果。同时，在大动物模型构建、疾病治疗临床试验等基因编辑的应用领域，我国已经进入国际第一阵营。未来，我国仍需进一步推进技术源头创新，抢占在该领域的国际话语权；并优化政策环境，保证我国基因编辑技术下游应用的快速健康有序发展。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是一种毒性强、污染广的真菌毒素，建立高效、准确、快速的AFB1检测方法具有重要意义。利用噬菌粒-辅助噬菌体展示系统构建单链抗体(single chain variable fragment，scFv)文库，应用“淘选-洗脱”的策略，是筛选高亲和配体的常用方法之一。同时结合同源建模和分子对接等计算机辅助手段，分析得到抗体与抗原的结合位点与关键氨基酸，为在基因水平改造抗体提供基础。本研究从AFB1-BSA免疫小鼠的脾细胞内扩增重链可变区和轻链可变区，将组合成的scFv片段插入噬菌粒pCANTAB5e中，构建了噬菌体展示单链抗体文库，以不同浓度的AFB1-OVA作为抗原，从文库中筛选到一株亲和力较好的抗AFB1单链抗体scFv，其亲和常数为8×105 L/mol；根据同源建模和分子对接发现，与抗原AFB1结合时，scFv中Tyr33、Ser52和Tyr102起关键作用，分别以π-π共轭键、氢键和范德华力与AFB1结合。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 近些年来DNA测序技术发展迅速，已经从第一代生化测序发展到第三代单分子测序。作为第三代测序技术中的一种，纳米孔测序技术是基于电信号的一种物理方法测序，不同于当前流行的其他测序技术。许多研究者通常将高通量测序技术应用于食品微生物的研究，但是将纳米孔测序技术应用于食品中微生物的检测却鲜有报道。Oxford Nanopore Technologies（牛津纳米孔科技公司）研发的DNA测序仪MinION，是世界首例用于商业测序的纳米孔测序仪，经过不断完善，近年来MinION在DNA测序中被广泛应用。MinION 测序一次需要的DNA量约1μg，其标准识别速度为一秒钟识别250个碱基，平均读长可至13kb~20kb，测序准确率可以达到98%。纳米孔测序的高识别速度和高准确率，完全满足快速检测的要求，将其应用于食品中微生物检测是完全可行的。
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